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讓專業(yè)人員告訴你使用細(xì)胞計數(shù)板時一定要注意哪些事

更新時間:2021-08-03瀏覽:1513次


    細(xì)胞計數(shù)板是一種常用的細(xì)胞計數(shù)工具,醫(yī)學(xué)上常用來計數(shù)紅細(xì)胞、白細(xì)胞等而得名,也常用于計算一些細(xì)菌、真菌、酵母等微生物的數(shù)量,是一種常見的生物學(xué)工具。

 

    細(xì)胞計數(shù)板的注意:

    鏡檢計數(shù)室。因前一次清洗不到位,或者保存過程中存在污染,更或者因操作不當(dāng)導(dǎo)致的計數(shù)室存在劃痕,若不及時清洗或更換,則會對后期實驗計數(shù)產(chǎn)生極大影響。所以,在每次使用血球計數(shù)板之前都需要加一步鏡檢計數(shù)室,如若在鏡檢時發(fā)現(xiàn)計數(shù)室有污物,則需按要求清洗并吹干后再進(jìn)行實驗。

    搖勻后取液。在吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)之前,需輕輕震蕩試管,使菌體分布均勻,防止聚沉淀,從而提高計數(shù)的代表性和準(zhǔn)確性。

    先蓋血蓋片后加菌液。在菌懸液搖勻后,應(yīng)先在血球計數(shù)板上蓋上血蓋片,再用滴管吸取少許菌懸液,從計數(shù)區(qū)中間平臺沿血蓋片的上邊緣滴入一小滴菌懸液,利用液體的表面張力一次性充滿計數(shù)區(qū)。若先加菌液再覆蓋血蓋片,則容易因為菌液加入過多,而導(dǎo)致血蓋片未與血球計數(shù)板支持柱接觸,血蓋片浮于菌液上方而導(dǎo)致最后計數(shù)偏大,同時會因為有氣泡產(chǎn)生而導(dǎo)致計數(shù)偏小。

    靜置片刻再計數(shù)。靜置5min,待菌懸液不再漂浮流動,酵母菌全部沉降后再將血球計數(shù)板放到顯微鏡下進(jìn)行計數(shù)。先在低倍鏡下找到需要觀察計數(shù)的大方格及中方格,將中方格移到視野中央,然后撥動轉(zhuǎn)換器移至高倍鏡進(jìn)行計數(shù)。

    高倍鏡下調(diào)亮度。低倍鏡下,用平面鏡和小光圈,可以清晰地看到血球計數(shù)板上的酵母菌。但是,撥動轉(zhuǎn)換器換到高倍鏡后,即使是用了平面鏡和最小光圈,視野里往往還是白茫茫一片,什么都看不見,這時候可以嘗試操作遮光器上的金屬遮光片進(jìn)行遮光處理。因為活的酵母菌和培養(yǎng)液的折光率相近,所以要在高倍鏡下將視野調(diào)得暗一些。

    掌握計數(shù)原則。一般選擇觀察的菌液濃度控制在每個小方格內(nèi)有4或5個菌體為宜,若其濃度太高,可適當(dāng)稀釋;并采用“計上不計下,計左不計右”的計數(shù)原則。

 

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